荧光显微镜：该方法的原理

的光进一步无机和有机流体吸收和再发射是磷光或荧光的结果。 现象之间的差是光束的吸收和发射之间的时间间隔的持续时间。 当这些过程的荧光几乎同时发生，而磷光 - 一些延迟。

历史信息

1852年，英国科学家斯托克斯，首先描述荧光。 他引入了新的术语与所述实验的结果 萤石， 其在紫外线照射下发出红色光。 斯托克斯注意到一个有趣的现象。 据发现，所述荧光辐射的波长总是比激发光的流动越大。

为了证实在19世纪的假设出现了很多实验。 他们指出，各种样品的紫外线的作用下发荧光。 在这些材料中，除其他外，一直晶体，树脂，矿物，叶绿素，生药，无机化合物，维生素，油。 直接用生物试验染料仅于1930年开始

荧光显微镜：描述

一些在20世纪研究的前半部分所用的材料都呈现出高的特异性。 стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. 由于采用了性能，这无法通过对比的方法来实现， 荧光显微镜的方法已成为生物医学和生物研究的重要工具。 同样获得了重要成果，并为材料。

? 哪些优点荧光显微镜的方法是什么？ 采用新材料已成为可能，并具有高度特异性细胞亚显微组分的选择。 荧光显微镜可以检测单个分子。 各种染料，允许多个项目的鉴定一次。 尽管设备，这又取决于样品的特定性质的衍射极限的空间分辨率的限制，低于该水平的分子的鉴定也完全可能的。 照射表现出自身荧光后的不同的样品。 这种现象被广泛应用于岩石学，植物学，半导体行业。

特点

研究动物组织或病原体通常比较复杂或过弱或非常强的非特异性自身荧光。 然而，在研究中的值获取引入在特定波长激发的材料组分和发射必要的光流的强度。 荧光染料作为附接至结构（可见或不可见），其能够独立地染料。 因此它们具有高选择性的目标，和量子产率。

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. 荧光显微镜自天然和合成染料的出现得到了广泛应用。 他们拥有发射和激发一定的强度分布和针对特定生物靶标。

单个分子的鉴定

通常情况下，在理想状态下，你可以注册一个独立的元素光晕。 为此，除其他事项外，有必要提供在检测器和光学背景的足够低的噪声。 荧光分子衰竭漂白可以发出高达300万。光子。 在此过程中20％的收集效率，并可以将它们在约60千元量寄存器。

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. 基于雪崩光电二极管或电子倍增荧光显微镜 ，使研究人员能够通过第二观察单个分子的行为，在某些情况下甚至几分钟。

复杂性

支持光学背景噪声的抑制的一个关键问题。 由于许多在过滤器和镜头表现出一定的自发荧光设计中使用的材料，在早期阶段的科学家的努力为导向，以生产具有低荧光成分的事实。 然而，随后的实验带来了新的结论。 , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. 特别是，人们发现， 荧光显微镜，基于全内反射，它允许实现低背景和高强度的激发光。

机制

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. 荧光显微镜的，基于全内反射的原理是利用渐逝波或倏逝的。 它发生在不同媒体之间的边界 折射率。 在这种情况下，光束通过棱镜。 它具有高折射率参数。

邻近于所述水溶液或玻璃具有低参数棱镜。 如果在它针对的是更关键的角度的光的光束，该光束被完全从界面反射。 这种现象，进而导致非传播波。 换句话说，所产生的电磁场穿入具有较低折射率的参数的距离小于200个纳米的介质。

倏逝波的光的强度将足以激发荧光团。 然而，由于其非常小的深度，它的体积会很小。 其结果是一个低层次的背景。

修改

荧光显微镜是基于全内反射，可以用落射照明来实施。 这需要具有高数值孔径透镜（至少1.4，但最好是它达到1.45-1.6），并且部分地照明场装置。 后者是具有小的光斑尺寸来实现的。 对于更大的均匀性使用薄的环，这是由流的一部分阻塞。 为临界角，在此之后有一个全反射，我们需要在透镜浸入介质和显微镜盖玻璃的折射的高水平。