分子遗传学研究方法

探索和鉴定在DNA结构中使用分子遗传方法的变体。 对于每一个DNA区域，它探讨了染色体，基因或等位基因的该区域中，方法不同。 底层每分子遗传方法包括一些或RNA和DNA的其它操作。 所有这些方法的特点是一个巨大的复杂性，无需实验室条件不能进行，工作人员必须是高素质的。 这项工作分几个阶段进行。

阶段

首先，将产生的RNA或DNA的样品。 在此，分子遗传学方法可被应用于几乎任何材料：血，白细胞下降，成纤维细胞培养物，粘膜（刮掉），甚至毛囊， - DNA可以从任何样品中获得。 它适用于使用任何分子遗传方法及其各种选项和长期分离的DNA被冷冻储存。 第二个阶段是专用于DNA的期望片段（扩增）的积累，因为它有助于确保在体外聚合酶链式反应（体外无生物体的参与）。 其结果是，通过该链反应所选择的DNA片段乘法，和DNA的增加数百万的倍量。

在分子遗传学研究方法的第三步是假定相乘DNA限制（这种分散，撕裂或切割）。 限制通过电泳在聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶进行。 这种分子遗传学的DNA片段的方法允许每个人采取在凝胶的特定位置。 此后，将凝胶用溴化乙锭进行处理，能够结合DNA，用紫外线照射，则可以观察到发光部分。 分子遗传学诊断方法是多种多样的和众多的，但前两个步骤是共同的。 但为了鉴定的DNA片段，该凝胶可以着色，以及许多其他现有的方法。

种类

用于检测结核分枝杆菌的最直接的和广泛的方法可以包括上述的分子遗传DNA学习方法。 其实质是，为了识别病原体DNA的特异性片段的扫描链的材料。 分子遗传学诊断技术还没有认识到这种疾病如肺结核更有效的方式。 利用聚合酶链反应（PCR），可以肯定的是，原来的DNA会增加拷贝数量在一百万次，也就是说，会出现放大，它会显示结果。 灵敏度水平非常高 - 比95％，这是该方法的主要优点多。

的的研究对产量多个拷贝的有效性的分子遗传学方法，其他人几乎加倍，因为在这种情况下，牵伸样品示出了特定的寡核苷酸序列提高到106倍。 甚至呼吸系统结核的培养诊断显著降低其灵敏度。 这就是为什么现代医学是基于结核病诊断的分子遗传学方法。 与高抗原变异的病原体尤其是在处理时，确定其它路的描述方法是有效的要困难得多-需要特殊的营养培养基 ，培养时间长。 生物化学和分子遗传方法产生上的结果非常不同的影响。

诊断结核病

结核病的马歇尔PCR诊断最常使用特异针对所有四种类型的疾病的那些DNA序列。 为了实现这一目标，往往使用检测序列的元素（IS-986，IS-6110）引物，因为这些元素表征高度洄游鱼类结核杆菌，总是在基因组中存在多个副本。 还提取DNA可以从任何其他合适的方法纯培养物和临床（患者痰）中进行。 例如，存在臂架方法，其中所述裂解缓冲液是基于硫氰酸胍和二氧化硅为载体DNA使用。 那不同的细菌差逐年增加，因此，在临床实践中已经建立了一个完全不同的层次组织的患者数：研究DNA的分子遗传方法已经打在诊断中起主要作用。

但是，我们必须承认，它也不是没有缺点。 该PCR方法是利用往往带来的假阳性结果数量庞大，其原因不仅是技术错误，而且该方法本身的特点。 另外，使用诊断的此方法确定的分枝杆菌，已被识别的生存力，这是根本不可能的。 但这种缺点是不是最重要的。 PCR诊断的分子遗传学方法需要分枝杆菌DNA的污染的风险。 为此认证要求，对于PCR实验室专门设计的硬盘，它们需要三个独立的前提。 PCR技术是现代的，非常复杂的，它需要使用适当的设备和高培训的人员。

bacterioscopy

当分析的诊断结果必须与其他数据进行比较：临床检查，摄片，涂片镜检，农作物，甚至响应特定的治疗是非常重要的。 在这个系列中，PCR的研究仅仅是组成部分之一。 检测的早期诊断病原体可以是最简单，最快速的方法 - 细菌。

有使用光显微镜（着色抗酸）和荧光（荧光染料着色）。 其优点是速度涂片结果。 但其缺点是正确地认为能力有限，由于低的灵敏度。 然而，这种方法给世界卫生组织的建议是最经济和地面检测肺结核病人。 分枝杆菌细菌学方法的检测具有预测值和估计的定量细菌排泄。 更有信心应对结核病的它的分子遗传学研究方法。

文化

分枝杆菌的更好的检测认识文化研究。 播种病料在制成蛋介质：Mordovsky，芬兰人II，LJ，等。 体外分枝杆菌药品和一些分枝杆菌的功效的间接证据和他们的殖民地性的基准，如果研究文化的应用方法。 为了提高病理物质的分枝杆菌接种隔离的比例保持在多种环境。

会议众多的文化，包括病原体格兰特和流体的需求。 使用在本系统和自动计量型VANTES增长。 作物必须在孵化举行长达七至八个星期。 通过这次与缺乏增长的作物可以被认为是负面的。 以检测结核分枝杆菌的最有效方式考虑的生物样品：诊断材料传染豚鼠，这是极其敏感的TB。

一些数字

研究的有趣的领域，这是由PCR诊断开是研究结核分枝杆菌 - 潜伏感染。 结核感染的现代概念暗示出一百岁的人谁是与结核分枝杆菌接触，九十很可能被感染，但其中只有10个是活动性疾病正在开发中。 别人有结核病的免疫力，而且由于案件百分之九十的感染仍然潜伏。 检测图案它帮助一个分子遗传方法。

遗传学家说，55那些农作物病理材料均为阴性，和人感染了结核杆菌的百分之八十，但没有疾病的放射学表现流动％的，接收PCR阳性反应。 它是帮助在通过PCR研究风险以确定患者中，他们的分析（显微镜和培养）的结果的遗传诊断方法为阴性，和亚临床感染结核分枝杆菌存在。

现代研究

俄罗斯联邦和细菌学实验室使用绝对浓度的加速方法：通过Griess试剂测试的分枝杆菌的硝酸盐还原酶活性。 抗结核中心使用一个方法，它允许以确定耐药性。 此接种在液体培养基中，在那里自动分枝杆菌的辐射和荧光会计系统的增长。 这样的分析是快速完成 - 长达两个星期。

目前，新方法正在开发之中：分枝杆菌的耐药性在基因型水平进行测量。 研究抗性基因的分子机制和示出了在分枝杆菌的存在。 这些基因与某些药物的耐药性有关。 例如，KASA基因，的inhA，katG基因耐异烟肼，rpoB基因 - 利福平16SP RNA基因和的rpsL - 链霉素，EMB1 - 乙胺丁醇，的gyrA - 氟喹诺酮等。

突变

现代诊断显著增加了分子基因水平的方法成为研究DNA，并允许进行突变的大规模研究在其所有的频谱。 现在我们知道，在516，526和531的密码子最常见的基因突变rpoB基因，并确定了各种药物的抗性。 还有的使用不仅是传统方法分枝杆菌的分型方法的整个范围 - 生物化学，生物和文化，同时也广泛应用于现代分子遗传技术。 已经有足够的，并提供用于检测单基因疾病的正确诊断方法。 它们是基于特定基因的确切面积DNA研究。 这通常是一个复杂的过程，耗时且昂贵的，而是通过分子遗传分析提供的数据，是比其他所有的分析数据更为准确，信息量大。

人们早就知道，DNA不会为有机体，它在任何有核细胞odnakova的整个一生都在变化，这使得有可能采取的身体绝对是全细胞分析，在个体发育的任何阶段。 受损的基因可以在第一症状出现到全面的临床疾病，以及健康人杂之前被检测到，但有在该基因的突变。 分子遗传学遗传病的诊断方法允许以揭示其（直接的方法，DNA诊断），以及分析疾病的隔离在家庭与标记位点DNA（遗传多态性），其与受损基因（即DNA诊断的间接途径）有着密切的联系。 直接或间接地 - 的任何DNA的诊断是基于识别严格定义的人DNA的部分的方法。

直接法

DNA诊断的直接方法是当罪魁祸首基因遗传病是已知的，如众所周知的，并且它的类型的突变。 例如，在许多疾病的合适的直接方法。 这 亨廷顿氏舞蹈病 （扩展CTG-重复），苯丙酮尿症（R408W），囊性纤维化（delF508，主要的变化）等。 直接法的主要优点是一家独资诊断的准确性，也没有必要做其他家庭成员的DNA分析。 如果发现相应基因的突变，它允许正好批准遗传，基因型确定诊断为背负家庭的其他成员。

直接诊断的另一个优点被认为是确定从亲戚和父母不良的突变谁死于这种疾病的杂合载体。 对于疾病的常染色体隐性遗传，这是特别真实的。 直接法的缺点也都可用。 应用它们，你需要确切地知道它的本地化谱和其突变的基因异常，外显子 - 内含子结构。 并非所有的单基因疾病今天都收到了这样的信息。 信息量直接的方法不能被认为是完整的，因为同一个基因可能有大量的病理突变导致遗传性疾病的发展。

间接的方法

在DNA诊断间接的方法，使用的话，在其他情况下，如果损坏的基因没有确定，但只有染色体，或者如果在线诊断没有给出结果（碰巧的是，如果基因复杂的分子组织或在很大程度上，如果有很多病理突变）。 间接的方法等位基因家庭进行的多态性标记的分离分析。 在相同的染色体区域或位点发现标记物紧密相连的疾病和代表缺失或插入，点置换，重复，和它们的多态性是由于不同的量在所述块单元。

最方便的间接诊断认为微卫星小卫星多态性，广泛分布于人类基因组。 其值在高信息含量的表示，如果对标记和基因之间的遗传距离是损害不太大。 在后者的情况下，估计精度被确定为在很大程度上重组的多态型标志和损伤之间的频率。 间接诊断方法还提供了患者和突变的携带者中所分析的人群研究的等位基因频率的强制预备步骤中，加上确定的非平衡和粘附标记物和突变等位基因重组的概率的必要性。

其他方法

显微镜研究下显现的RNA或DNA的短片段，以及单基因无法进行，因此，以识别由分子遗传学诊断所需的突变。 有一个“人类基因组计划”，以及在分子遗传学其他进步极大地扩展了遗传性疾病的诊断的可能性 - 前和产后。 这些方法可以提供早期检测和做出预测多糖和单基因疾病，其登场发生在成年期。 不幸的是，由于分子遗传学研究的技术能力有时是超越了在关系到继承设置的伦理界限，特别是当诊断是在青春期和童年。

染色体结构和数目异常是疾病和癌症，许多畸形的最常见的原因。 染色体异常需要被识别，这对于家庭辅导重要 - 的预测，评估，在未来怀孕生育的风险一起。 染色体分析是“金标准”基因诊断的，但它是有限的。 只有方法 分子遗传学分析 可以做得更多，因为有使用克隆为基础的技术能够在它们的高灵敏度的荧光标记来识别是不可能检测古典微妙的染色体变化 的细胞遗传学研究。 这些技术正越来越多地扩大我们的诊断能力，检验时，儿童发育障碍，智力低下，与许多其它遗传性疾病。

发现

这是对人类非常重要的是该基因的结构和知识的功能，类型的变动的，检测发生在与分子遗传学的发展连接遗传性疾病的能力。 其方法是瞄准了DNA分子的研究 - 当它是正常的，当它被损坏。 的核苷酸（DNA）脱氧核糖核酸序列的制备从接收的样本，以确定个别的片段在阶段延伸。 从细胞的基因组DNA，限制性（撕裂），扩增（克隆），电泳片段的分离（通过琼脂糖凝胶分离其电荷及分子量）。 位于一个离散条带的表面上的特定片段的鉴定。

然后进入行为特殊的过滤器，通过该传递用的克隆DNA片段或合成的放射性探针的每个片段杂交的控制，这将等于各测试样品。 如果你改变位置或长度与探头相比，如果一个新的片段或消失 - 这一切都表明，所分析的基因发生了核苷酸序列重组。 有分子遗传学研究的八个基本技术：测序（确定DNA序列的），聚合酶链式反应（在序列的数目增加），引物的已知基因的制备，DNA克隆，生产重组分子的衍生蛋白由于重组分子，从而形成完整的组（集合库）克隆通过使用限制性内获得的片段。